概述
通过应用PyroHotStart技术，达到非特异性扩增最小化，PCR反应效率最大化从而有效扩增微量模板DNA。PyroHotStart技术是Bioneer独有的一项专利技术，它使用焦磷酸盐和焦磷酸酶通过减少PCR反应之前（零循环）发生的非特异性反应来提高特异性。另外，它通过除去在每个扩增循环中发生并用作PCR抑制剂的PPi来提高反应效率。
(a)在Zero cycle抑制PCR反应
制备PCR混合液后，使用PPi防止在达到预变性温度之前形成非特异性反应物。 为了使DNA聚合酶具有活性，需要镁离子，因为添加到混合液中的PPi与镁离子具有高亲和力，可以通过保留镁离子来抑制PCR反应
(b) 变性（Denaturation）
在变形步骤中，当反应温度升高时，添加到混合液中的ppase会被激活，从而将PPi分解为Pi解离镁离子。解离的镁离子与DNA聚合酶结合并激活该酶催化PCR反应
(c)退火（Annealing） & 延伸（Extension）
随着PCR循环的进行，活化的DNA聚合酶会扩增目标DNA
特点及优势
特异性
通过应用PyroHotStart技术，可以最大程度地减少非特异性扩增产物的产生，并且由于包含了焦磷酸酶，因此通过去除焦磷酸（每个循环生成的PCR抑制剂）可以使PCR效率最大化
兼容性
其出色的兼容性适用于多款的实时荧光定量PCR仪
全面性
无论基因的类型如何（包括DNA，cDNA和高GC模板），均可获得有效的定量PCR结果
便利性
每个管均包含DNA聚合酶和PCR所需的所有组分，仅需模板DNA，目标基因的探针和引物以及D.W即可进行反应
稳定性
PCR反应混合物中加入了稳定剂，可增强稳定性，使酶活性在-20°C下保持稳定2年
重现性
ISO 9001质量体系下的批量生产可最大程度地减少批次之间的差异，即使在重复实验中也可得到可重复的实验结果
应用
• Gene expression profiling
• Target DNA quantification
• Microbial detection
• Viral/bacterial pathogen load determination
• Probe-based real-time PCR primer pair performance evaluation
实验数据
Figure. Real-Time PCR Data of AccuPower® Dualstar™ qPCR PreMix
AccuPower® Dualstar™ qPCR PreMix provides at least 7 orders of magnitude in dynamic range (107 ~ 101 copies/reaction).
(A) : Amplification curve. West Nile Virus (WNV) primers and TaqMan-based probe were added into AccuPower® Dualstar™ qPCR PreMix.
A series of WNV positive control diluents were tested.
(B) : Standard curve. All data were obtained using Exicycler™ 96 Real-Time Quantitative Thermal Block (Bioneer Co.).
